등록번호

안내서-0867-01

화장품 단회투여독성 동물대체시험법 (독성등급법) 가이드라인

(민원인 안내서)

2018.  6. 26.

지침서ㆍ안내서 제ㆍ개정 점검표
명칭	화장품 단회투여독성 동물대체시험법(독성등급법) 가이드라인(민원인 안내서)
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상기 사항에 대하여 확인하였음.
2018년 6월 26일
			담당자 확 인(부서장)	고 경 육 박 기 숙

이 안내서는 화장품 단회투여독성 동물대체시험법(독성등급법) 가이드라인에 대하여 알기 쉽게 설명하거나 식품의약품안전처의 입장을 기술한 것입니다.

본 안내서는 대외적으로 법적 효력을 가지는 것이 아니므로 본문의 기술방식(‘∼하여야 한다’ 등)에도 불구하고 민원인 여러분께서 반드시 준수하셔야 하는 사항이 아님을 알려드립니다. 또한, 본 안내서는 2018년 6월 현재의 과학적ㆍ기술적 사실 및 유효한 법규를 토대로 작성되었으므로 이후 최신 개정 법규 내용 및 구체적인 사실관계 등에 따라 달리 적용될 수 있음을 알려드립니다.

※ “민원인 안내서”란 대내외적으로 법령 또는 고시ㆍ훈령ㆍ예규 등을 알기 쉽게 풀어서 설명하거나 특정한 사안에 대하여 식품의약품안전처의 입장을 기술하는 것(식품의약품안전처 지침서등의 관리에 관한 규정 제2조)

※ 본 안내서에 대한 의견이나 문의사항이 있을 경우 식품의약품안전평가원 독성평가연구부 특수독성과에 문의하시기 바랍니다.

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팩스번호: 043-719-5150

제·개정 이력

연번	제·개정번호	승인일자	주요내용
1	B1-2008-4-002	2008.11.	화장품 독성시험 동물대체시험법 가이드라인(II) 제정
2	안내서-0749-01	-	「식약처 지침서등의 관리에 관한 규정」 개정에 따른 일괄 재분류 (규제개혁담당관실-3761호, 2017.5.16)
3	안내서-0867-01	2018.06.	제목을 “ 화장품 단회투여독성 동물대체시험법(독성등급법) 가이드라인”으로 분리‧수정, 내용 정비 및 OECD 영문본을 추가하여 개정

Ⅰ. 개요	6

Ⅱ. 시험원리	6

Ⅲ. 제한점 및 고려사항	6

Ⅳ. 시험방법	7

Ⅴ. 시험결과 및 보고	8

- 별첨 1 : 번역본

- 별첨 2 : 원문

목  차

화장품 단회투여독성 동물대체시험법(독성등급법) 가이드라인

Ⅰ. 개요

본 시험법은 동물 3마리를 사용하여 단계적 절차에 따라 시험을 수행하는 단회투여독성시험법(독성등급법, Acute Toxicity Class Method)으로 시험물질의 GHS (Global Harmonized System of classification and labelling of chemicals) 카테고리를 판정하는 방법이다.

시험방법은 고정용량을 단계별로 동물에 투여하여, 동물의 사망여부에 따라 시험을 종료하거나 다음 단계의 방법을 결정하는 것이다. 본 시험법에서는 정해진 4가지 용량 중 하나를 선택하여 투여한다. 투여 후 동물의 사망 여부를 판단하여 시험물질의 독성 카테고리를 분류한다.

이 시험법은 다른 단회투여독성시험법과 유사한 방식으로 시험물질의 GHS 카테고리를 판정하지만 매우 적은 수의 동물을 사용하는 것이 특징이다.

Ⅱ. 시험법의 원리

본 시험법의 원리는 동물을 최소한으로 사용하는 단계별 절차에 따라 진행하여 시험물질의 분류에 필요한 급성 독성 정보를 충분히 확보하는 것이다. 시험물질의 고정용량을 경구투여하여 한 단계에서 시험동물의 사망 유무에 따라 다음 단계의 방법이 결정된다. 다음 단계에서는 더 높은 용량 또는 더 낮은 용량을 선택하여 추가로 3마리에게 투여한다.

Ⅲ. 제한점 및 고려사항

부식성 또는 심각한 자극성 때문에 과도한 통증이나 고통을 유발하는 것으로 알려진 시험물질의 용량은 투여할 필요가 없다. 한계시험은 특정한 규제에 의해 타당성이 입증된 경우에만 추가적으로 5,000 mg/kg의 고정용량을 고려할 수 있다. 그러나 동물 복지 차원에서 2,000~5,000 mg/kg에서 시험을 실시하는 것은 권장되지 않는다.

본 시험법은 정확한 LD50를 계산하기 위한 것은 아니지만, 동물의 사망이 주요한 평가 항목이기 때문에 치사가 예상되는 경우의 용량범위를 추측할 수 있다.

시험에 앞서 시험물질에 대하여 가능한 모든 정보를 고려해야 한다. 시험물질명과 화학구조, 물리화학적 특성, 생체외(in vitro) 또는 생체내(in vivo) 독성시험 결과, 구조적으로 연관이 있는 물질 또는 유사한 복합물질의 독성자료 그리고 시험물질의 예상용도 등을 포함한 모든 정보는 적절한 시작용량을 정하는데 도움을 준다.

Ⅳ. 시험방법

4.1. 시험 준비

일반적으로 시험동물은 암컷 랫드를 주로 사용하며 수컷을 사용할 경우에는 그 타당성을 제시해야 한다. 시험동물은 투여 최소 5일전에 사육실에 반입하여 순화시킨 다음, 무작위로 선정하여 식별표시를 한다. 동물의 적정 연령, 적절한 사육실 및 식이조건은 별첨 1의 Ⅳ항을 참조한다.

시험물질을 조제할 때 우선적으로 물을 사용한 용액/현탁액/유화액, 그 다음으로 옥수수기름(corn oil)을 사용한 용액/현탁액/유화액이 권장되며 그 외에 다른 용매로 용액을 조제할 수 있다. 물 이외의 다른 용매를 사용하는 경우에는 그의 독성학적 특성을 알아야한다. 시험기간 동안 조제물의 안정성이 확보되지 않는 경우 투여직전에 물질을 조제한다.

4.2. 투여

시험물질을 한 번에 투여할 수 있는 최대 액량은 설치류의 경우 1 mL/100 g (체중)을 넘지 않아야 한다. 하지만 수용액인 경우에는 2 mL/100 g 까지도 고려할 수 있다. 시험물질은 적합한 삽관 캐뉼라나 위관을 사용하여 단일용량을 경구투여하며, 한 번에 투여하는 것이 곤란한 시험물질은 24시간 이내에 분할 투여할 수 있다.

4.3. 동물의 수와 용량

동물은 단계별로 3마리를 사용한다. 시작용량은 동물의 사망을 유발할 가능성이 높은 용량을 고려하여 5, 50, 300, 2,000 mg/kg 중 하나를 선택하며, 부록 2a~2d에 제시된 절차 흐름도에 따라 시험을 수행한다. 시험물질에 관한 정보가 없다면 동물 복지 차원에서 시작용량을 300 mg/kg 으로 하는 것이 권장된다.

각 용량에서 투여시간 간격은 독성증상의 발생, 지속시간, 심한정도에 따라 결정해야 하므로, 다음 단계의 동물은 이전 투여 동물의 생존을 확신할 때까지 투여를 연기한다.

4.4. 한계시험

한계시험(limit test)은 최고 시작용량(2,000 mg/kg)에서도 사망이 발생할 가능성이 없거나, 시험물질이 규제 한계용량 초과에서만 독성을 나타낸다는 증거가 있는 경우에 실시한다. 부록 3에 명시된 바와 같이 2,000 mg/kg 에서의 한계시험은 총 6마리(단계별 3마리 사용)를 사용하며, 5,000 mg/kg 에서의 한계시험은 3마리로 실시한다.

4.5. 관찰 및 판정

투여 후 30분 동안 최소 1회 관찰한다. 이후 첫 24시간 동안 주기적으로 관찰하며, 14일 동안 동물의 독성증상, 지속시간, 심한정도 등을 관찰하고 기록해야 한다. 이 과정에서 특히 첫 4시간 동안 주의를 기울인다.

시험 도중에 사망한 동물(동물복지차원에서 시험도중에 안락사 시킨 동물 포함)과 생존한 모든 동물은 부검을 실시하며, 24시간 이상 생존한 동물에서 이상소견을 보이는 장기는 조직병리학적 검사를 실시한다.

시험물질의 고정용량을 투여한 후 동물의 치사율에 따라 다음단계의 시험방법이 결정되고 최종적으로 GHS 카테고리를 결정한다(부록 2a, 2b, 2c, 2d 참조).

Ⅴ. 시험결과 및 보고

동물별로 모든 데이터를 도표 형식으로 정리하여 제시한다. 데이터에는 시험 그룹별로 전체 동물의 수, 독성증상을 나타낸 동물의 수, 시험 도중에 사망한 동물이나 인도적으로 안락사 시킨 동물의 수, 동물별 사망시점, 독성 영향에 대한 설명 및 부검 결과를 기술한다.

별첨 1. 번역본(OECD TG 423)

단회투여독성시험-독성등급법

Acute Oral Toxity-Acute Toxic Class Method

Ⅰ. 서론

1. OECD 가이드라인은 과학적 진보 또는 평가 방법의 변화를 고려하여 주기적으로 검토된다. 최초 가이드라인 423은 1996년 3월, 시험지침 401에 기술된 기존의 급성 독성 시험의 두 번째 대안으로 채택되었다. 여러 전문가 회의의 권고에 따라 개정은 다음과 같은 이유로 적합하게 고려되었다. ⅰ) 1996년 가이드라인에서 권고된 cut-off와 다른 화학 물질 분류에 대한 LD50 cut-off 값이 국제적으로 합의되었다. ⅱ) 한 성별(주로 암컷)의 시험은 현재 충분히 고려되었다.

2. 본 가이드라인에 제시된 독성등급법(1)은 단계별로 한 성별의 동물 3마리를 사용하는 단계적 절차이다. 동물의 사망률과 사망 직전 상태에 따라, 시험물질의 단회투여 독성을 판단하려면 평균적으로 2~4단계가 필요할 수 있다. 이 절차는 재현성이 있으며 매우 적은 동물을 사용하고 다른 단회투여 독성시험법과 유사한 방식으로 성분의 카테고리를 정할 수 있다. 독성등급법은 분류 목적과 위험 요소 평가를 위해 성분의 카테고리를 정할 수 있도록, 적절하게 구분하여 정한 고정용량에서 생체 측정 방식의 평가로 실시한다(2)(3)(4)(5). 1996년에 채택된 이 방법은 개별 국가(6)와 국제적인(7) 차원의 문헌에서 확보된 LD50 데이터에 대비하여 광범위한 생체내(in vivo) 검증을 거쳤다.

3. 본 가이드라인에서 주어진 목적을 위한 가장 적절한 시험방법을 선택하기 위해서는 독성등급법의 지침서를 참조하면 된다. 또한 해당 지침서는 본 가이드라인의 수행과 해석에 대한 추가적인 정보를 담고 있다.

4. 본 가이드라인에서 사용하는 용어의 정의는 부록 1에 제시되어 있다.

Ⅱ. 사전 고려사항

5. 부식성 또는 심각한 자극성 작용 때문에 뚜렷한 통증과 고통을 유발하는 것으로 알려진 용량의 시험물질은 투여할 필요가 없다. 사망 직전의 동물이나 뚜렷한 통증 상태 또는 중증의 지속적 고통 징후를 보이는 동물을 인도적으로 안락사 시키는 기준 및 시험 도중에 예상되는 또는 임박한 죽음에 관한 가이던스는 별도의 가이던스 문서에서 다루었다.

6. 이 방법은 미리 정한 용량을 사용하며, GHS(Globally Harmonized System of classification and labelling of chemicals) 카테고리에 의거하여 특정 성분의 카테고리를 정하고 분류할 수 있다(9).

7. 원칙적으로 이 방법은 LD50를 정확하게 계산하기 위한 것이 아니며, 일정 비율의 동물 사망이 이 시험의 종료시점이므로 치사가 예상되는 경우의 투여 범위를 결정할 수 있다. 최소한 2개 용량이 0%보다 높고 100%보다 낮은 사망률을 유발하는 경우에만 이 방법으로 LD50을 결정할 수 있다. 시험물질에 관계없이, 미리 정한 용량으로 동물 수 및 동물 상태 등에 따라 명확히 분류된 그룹의 동물에게 시험하면 실험실간 보고의 연계성이나 반복성을 향상시킬 수 있다.

8. 시험 시작에 앞서 시험물질에 관한 모든 가용 정보를 검토한다. 시험물질의 기본 정보와 화학적 구조, 물리화학적 특성, 다른 생체외(in vitro) 또는 생체내(in vivo) 독성 시험 결과, 시험물질 성분과 구조적 연관성이 있는 성분의 독성 데이터, 그리고 그 성분의 예상용도 등에 관한 정보가 이에 해당된다. 이러한 정보는 사람 건강 보호에 이 시험이 연관이 있으며 적절한 시작용량을 선정하는데 도움이 될 수 있다.

Ⅲ. 시험법의 원리

9. 단계별로 동물을 최소한으로 사용하는 단계별 절차에 따라, 시험물질의 분류에 필요한 급성 독성 정보를 충분히 확보한다는 것이 이 시험의 원리이다. 시험물질은 지정 용량 가운데 하나로 하여, 시험동물 그룹에게 경구투여한다. 단계별 절차에 따라 시험을 실시하는데, 단계별로 동일성별의 동물 3마리(일반적으로 암컷)를 사용한다. 한 단계에서 시험 동물의 사망 유무에 따라, 다음 단계의 필요성과 방법이 결정된다.

- 추가 시험 불필요

- 동일 용량을 추가로 3마리에게 투여

- 한 단계 높은 용량 또는 한 단계 낮은 용량을 추가로 3마리에 투여

10. 시험 절차에 관한 세부 사항은 부록 2에 기술되어 있다. 이 방법은 시험 성분을 고정 LD50 기준값에 의해 정의된 일련의 독성 클래스 가운데 하나로 분류하는 판단을 내릴 수 있도록 한다.

Ⅳ. 시험준비

가. 동물 종의 선정

11. 다른 설치류를 사용할 수도 있지만, 가장 바람직한 것은 랫드이다. 일반적으로 암컷 랫드를 사용한다(8). 기존 LD50 시험에 관한 문헌을 조사한 결과, 일반적으로 성별 사이의 감수성 차이가 별로 없지만, 차이가 있는 경우에 암컷이 약간 더 민감한 것으로 나타났기 때문이다(10). 하지만 구조와 연관된 독성 또는 독성동태학적 특징을 알고 있으며 이에 따르면 수컷이 더 민감한 경우에는 수컷을 사용한다. 수컷을 상대로 시험을 실시한다면, 그 타당성을 제시해야 한다.

12. 일반적으로 실험실에서 사용하는 건강하고 젊은 성체 동물 종을 사용한다. 암컷은 새끼를 낳은 적이 없고 새끼를 배지 않은 상태여야 한다. 투여 시작 시점의 동물 연령은 8주에서 12주 사이여야 하며, 몸무게는 앞서 투여한 동물의 체중 평균 대비 ± 20% 구간에 속해야 한다.

나. 사육 및 식이조건

13. 시험동물 사육실의 온도는 22℃(±3℃)이어야 한다. 상대 습도는 최소한 30%로 하고 실내 청소 기간 이외에는 70%를 넘지 않도록 하는 것이 바람직하나, 50~60%를 목표로 한다. 인공조명을 사용하며, 12시간 간격으로 명암 주기를 조정한다. 일반적인 설치류 사료를 사용하며 음용수는 무제한 공급한다. 동물을 용량별로 그룹을 지어 케이지에 넣지만, 케이지별 동물의 수는 각 동물을 명확히 관찰하는데 방해가 되지 않아야 한다.

다. 동물 준비

14. 실험 조건에 순응할 수 있도록, 적어도 투여 5일 전에 동물을 무작위로 선정하고 개별적으로 식별 표시를 하며 각자의 케이지에 넣는다.

라. 시료 준비

15. 일반적으로 시험물질은 농도를 달리하여 시험할 범위로 만들어 동일한 용량으로 투여한다. 최종 액상 제품이나 혼합물을 시험한다면, 일정 농도의 미 희석 시험물질을 사용하는 것이 그 성분의 위해 평가와 보다 관련성이 있을 것이다. 어떤 경우이건 최대 투여 액량을 넘지 않도록 한다. 한 번에 투여할 수 있는 최대 액량은 시험동물의 크기에 따라 다르다. 설치류의 경우에는 체중 100 g 당 1 mL을 넘지 않아야 한다. 하지만 수용성 용액인 경우에는 2 mL/100 g 까지도 고려할 수 있다. 시험물질을 조제할 때 물을 사용한 용액/현탁액/유화액, 그다음으로 옥수수기름(corn oil)을 사용한 액상/현탁액/유화액을 권장한다. 물 이외의 다른 용매를 사용하는 경우에는 그 용매의 독성학적 특성을 알아야 한다. 사용 기간까지 조제물의 안정성이 확보되지 않았다면 투여 직전에 조제한다.

Ⅴ. 시험절차

가. 투여

16. 시험물질은 위관이나 적합한 삽관 캐뉼라를 사용하여 경구투여(gavage) 방식으로 단일용량을 투여한다. 또한, 한번에 투여하는 것이 곤란한 시험물질에 대해서는 24시간 이내에 분할 투여할 수도 있다. 다만 분할하여 투여한 경우는 그 이유를 명확히 하는 것이 필요하다.

17. 투여에 앞서 동물을 절식시킨다(예, 랫드의 경우에는 밤새 사료를 주지 않고(음용수는 제외), 마우스인 경우에는 사료를 3~4시간 동안 주지 않는다(음용수는 제외)). 절식 기간이 지난 다음에 체중을 재고 시험물질을 투여한다. 시험물질 투여 이후에는 랫드의 경우에 3~4시간, 마우스는 1~2시간 동안 추가로 사료를 주지 않을 수 있다. 일정 기간 동안 나누어 투여하는 경우에는, 기간에 따라 사료와 음용수를 동물에게 공급할 필요가 있을 수 있다.

나. 동물의 수와 용량

18. 단계별로 3마리를 사용한다. 시작용량으로 사용할 용량은 4개(5, 50, 300, 2,000 mg/kg) 중 하나로 한다. 시작용량은 투여 동물 일부의 사망을 유발할 가능성이 가장 높은 것이어야 한다. 시작용량별 절차 흐름도가 부록 2에 정리되어 있다.

19. 최고 시작용량(2,000 mg/kg)에서도 사망이 발생할 가능성이 없다는 정보가 있으면, 한계시험을 실시해야 한다. 시험물질에 관한 정보가 없다면, 동물 복지 차원에서 시작용량을 300 mg/kg 으로 하는 것이 권장된다.

20. 시험물질 투여 시간 간격은 독성증상의 발생, 지속 기간, 심한정도 따라 결정한다. 이전 투여 동물의 생존을 확신할 때까지, 다음 단계용량의 동물 투여를 연기한다.

21. 예외적으로, 그리고 규제 필요성 때문에 타당성이 있는 경우에만, 추가적으로 5,000 mg/kg 용량의 투여를 고려할 수 있다(부록 3 참조). 동물복지 차원에서 GHS 카테고리 5 범위(2,000~5,000 mg/kg)에서 동물시험을 실시하는 것은 권장되지 않으며, 이 시험 결과가 사람이나 동물의 건강 또는 환경 보호 측면과 직접적인 연관성을 가질 가능성이 높은 경우에만 이 방법을 검토한다.

다. 한계시험

22. 한계 용량 시험은 해당 시험물질이 비독성일 가능성이 있다는 정보, 즉 규제 한계 용량 초과에서만 독성을 나타낸다는 증거가 있는 경우에 적용한다. 시험물질의 독성 정보는 독성학적 유의성이 있는 것으로 알려진 성분과 그의 비율을 고려하여, 유사한 화합물이나 혼합물 또는 제품의 시험 결과에서 확보할 수 있다. 독성 정보가 거의 없거나 시험물질이 독성을 가질 것으로 예상되는 경우에는 본 시험을 실시한다.

23. 2,000 mg/kg 용량 수준에서의 한계시험은 6마리로 실시할 수 있다(단계별로 3마리). 예외적으로는 5,000 mg/kg 용량 수준에서의 한계시험을 3마리로 실시할 수 있다(부록 3 참조). 시험 성분 관련 사망이 발생하면, 한 단계 낮은 용량에서 추가적인 시험을 실시할 필요가 있을 수 있다.

라. 관찰

24. 투여 동물을 개별적으로 관찰하며, 투여 이후 30분 동안 최소 1회 관찰하고 이후 처음 24시간 동안 주기적으로 관찰하며(특히, 처음 4시간 동안 주의하여 관찰), 이후에는 동물 복지 차원에서 안락사 시켰거나, 실험에서 제외된 동물을 제외하고는 시험동물을 14일 동안 매일 관찰한다. 하지만 관찰 기간을 엄격하게 고정시킬 필요는 없다. 독성 반응, 시험 개시시간, 회복 기간을 감안해 결정하며, 그러므로 필요한 경우에는 늘어날 수도 있다. 독성증상이 나타나고 사라지는 시기가 중요하다. 독성증상이 지연되어 나타나는 경향이 있을 때 특히 그렇다(11). 모든 관찰 내용을 동물별 기록서에 체계적으로 기록한다.

25. 동물이 계속 독성증상을 보이면, 추가 관찰이 필요하다. 이때 피부와 털, 눈, 점막, 그리고 호흡기, 자율신경계와 중추신경계, 그리고 체성운동 활동과 행동 패턴의 변화를 관찰한다. 진전, 경련, 타액 분비, 설사, 무기력, 수면, 혼수상태의 관찰에 주의를 기울인다. 사망 직전 상태인 동물과 심각한 통증이나 심각한 고통 징후를 보이는 동물은 인도적으로 안락사 시킨다. 동물을 인도적으로 안락사 시키거나 동물이 사망한 상태로 발견되면, 사망 시점을 최대한 정확하게 기록한다.

마. 체중

26. 시험물질을 투여하기 직전과 이후 매주 동물의 체중을 잰다. 체중 변화를 계산하고 기록한다. 시험 종료 시에 생존 동물의 체중을 측정하고 인도적으로 안락사 시킨다.

바. 병리

27. 시험한 모든 동물(시험 도중에 사망한 동물이나 동물 복지 차원에서 시험 도중에 안락사 시킨 동물 포함)을 부검한다. 각각의 동물에 대하여 모든 육안적 부검소견을 기록한다. 첫 번째 투여 이후 24시간 이상 생존한 동물 중에서 육안적으로 이상소견을 보이는 동물들은 조직병리학적 검사를 실시하여 유용한 정보를 얻도록 한다.

Ⅵ. 시험결과 및 보고

가. 시험자료

28. 동물별로 데이터를 제시한다. 또한 모든 데이터를 도표 형식으로 정리하여, 시험 그룹별로 전체 동물의 수, 독성증상을 보인 동물의 수, 시험 도중에 사망한 동물이나 인도적으로 안락사 시킨 동물의 수, 동물별 사망 시점, 독성 영향에 대한 설명과 시간별 경과, 그리고 회복성, 부검 결과를 기술한다.

나. 시험결과 평가

29. 시험보고서에는 다음과 같은 정보를 포함하여야 한다.

1) 시험물질

-  물리적 특성, 순도, 그리고 관련성이 있는 경우에는 물리화학적 특징(이성질체 포함)

-  기본 식별 정보(CAS 번호 포함)

2) 용매

- 물 이외의 용매를 사용하는 경우에는 그 용매 선택의 이유

3) 시험동물

-  종/계통

-  알고 있는 경우에는 동물의 미생물학적 상태

-  동물의 수, 연령, 성별(암컷 대신에 수컷을 사용한 경우 그 이유)

-  출처, 사육 조건, 사료 등

4) 시험조건

-  시험물질의 물리적 상태에 대한 설명, 시험물질의 조성에 대한 설명

-  투여량과 투여시기를 포함하여 시험물질의 투여에 관한 정보

-  사료와 물의 품질(사료 종류/출처, 물의 출처 포함)

-  시작용량 선정 근거

5) 결과

-  동물별 반응 데이터와 용량 수준의 도표화(즉, 사망을 포함하여 독성증상을 보인 동물과   독성증상의 특성, 심각도, 지속 기간)

-  체중과 체중 변화

-  투여 당일과 이후 주간 간격으로 측정된  동물 체중과 사망 또는 인도적 안락사 당시의 체중

-  시험 도중 사망한 경우에는 그 일시

-  독성증상 발현 시간과 동물별로 독성증상의 회복성 여부

-  가능한 경우, 동물별 부검 소견과 조직 병리학적 소견 결과

6) 고찰과 결과의 해석

7) 결론

Ⅶ. 참고문헌

1. Roll R., Hoer-Bosse Th. And Kayser D. (1986). New Perspectives in Acute Toxicity Testing of Chemicals. Toxicol. Lett., Suppl. 31, 86.

2. Roll R., Riebschläger M., Mischke U. and Kayser D. (1989). Neue Wege zur Bestimmung der akuten Toxizitat von Chemikalien. Bundesgesundheitsblatt 32, 336-341.

3. Diener W., Sichha L., Mischke U., Kayser D. and Schlede E. (1994). The Biometric Evaluation of the Acute-Toxic-Class Method (Oral). Arch. Toxicol. 68, 559-610.

4. Diener W., Mischke U., Kayser D. and Schlede E. (1995). The Biometric Evaluation of the OECD Modified Version of the Acute-Toxic-Class Method (Oral). Arch. Toxicol. 69, 729-734.

5. Diener W., and Schlede E. (1999) Acute Toxicity Class Methods: Alternatives to LD/LC50 Tests. ALTEX 16, 129-134.

6. Schlede E., Mischke U., Roll R. and Kayser D. (1992). A National Validation Study of the Acute-Toxic-Class Method - An Alternative to the LD50 Test. Arch. Toxicol. 66, 455-470.

7. Schlede E., Mischke U., Diener W. and Kayser D. (1994). The International Validation Study of the Acute-Toxic-Class Method (Oral). Arch. Toxicol. 69, 659-670.

8. OECD (2,000) Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation Environmental Health and Safety Monograph Series on Testing and Assessment No 19.

9. OECD (1998) Harmonized Integrated Hazard Classification System For Human Health And Environmental Effects Of Chemical Substances as endorsed by the 28th Joint Meeting of the Chemicals Committee and the Working Party on Chemicals in November 1998, Part 2, p.11 [http://webnet1.oecd.org/oecd/pages/ home/displaygeneral/0,3380,EN-do cuments-521-14-no-24-no-0,FF.htmL].

10. Lipnick R L, Cotruvo, J A, Hill R N, Bruce R D, Stitzel K A, Walker A P, Chu I; Goddard M, Segal L, Springer J A and Myers R C (1995) Comparison of the Up-and Down, Conventional LD50, and Fixed Dose Acute Toxicity Procedures. Fd. Chem. Toxicol 33, 223-231.

11. Chan P.K. and A.W. Hayes. (1994). Chap. 16. Acute Toxicity and Eye Irritancy. Principles and Methods of Toxicology. Third Edition. A.W. Hayes, Editor. Raven Press, Ltd., New York,

부록 1. 용어 정의

급성 경구 독성(Acute oral toxicity) : 어떤 성분의 단일용량 경구 투여 이후 또는 24시간 이내에 여러 용량을 투여한 이후에 나타나는 이상 반응을 의미한다.

지연 사망(Delayed death) : 동물이 48시간 이내에 죽지 않거나 사망 직전으로 보이지 않았지만, 그 후 14일 관찰기간 동안 사망하는 것을 의미한다.

투여 용량(Dose) : 투여한 시험 성분의 양을 의미한다. 용량은 시험동물의 단위 체중 당 시험 성분의 중량(예, mg/kg)으로 나타낸다.

화학물질에 대한 분류·표시 국제조화시스템, (GHS, Globally Harmonised Classification System of Classification and Labelling of Chemicals) : OECD (인체, 건강 및 환경), UN 위험 물품 운송에 관한 전문가 위원회(이화학적 특징), ILO(위험 요소 정보 교환)이 공동을 추진하는 프로그램으로, IOMC (Interorganisation Programme for the Sound Management of Chemicals)이 업무를 조정한다.

임박한 죽음(Impending death): 다음 관찰시간 이전에 빈사상태 또는 사망이 예상될 때를 말함. 설치류에서 이러한 상태를 나타내는 증상은 경련, 옆으로 누운 자세, 누움, 발작 등이다. (자세한 내용은 인도적 종료시점 지침문서(Humane Endpoints Guidance Documents)(8) 참조).

LD50 : 경구 투여 시에 50%의 동물에서 사망을 유발할 것으로 예상되는, 통계적으로 도출한 단일용량을 의미한다. LD50은 시험동물의 단위 체중 당 시험 성분의 중량(mg/kg)으로 나타낸다.

한계 용량(Limit dose) : 시험 시의 상한 한계에 해당되는 용량을 의미한다(2,000 또는 5,000 mg/kg).

빈사상태(Moribund status): 생존가망이 없거나 죽어가는 상태(자세한 내용은 인도적 종료시점  지침문서(8) 참조).

예견된 죽음(Predictable death): 계획한 시험 종료시점 이전에 사망을 예측할 수 있는 임상징후가 나타나는 경우. 예: 사료나 물에 접근 불가(자세한 내용은 인도적 종료시점 지침문서(8) 참조).

부록 2. 시작용량 각각에 대해 준수할 절차

1. 공통

가. 시작용량 각각에 대하여 준수해야 할 절차가 이 부록에 포함된 각 시험계획에 제시되어 있다.

- 부록 2a: 시작용량 5 mg/kg･w

- 부록 2b: 시작용량 50 mg/kg･w

- 부록 2c: 시작용량 300 mg/kg･w

- 부록 2d: 시작용량 2,000 mg/kg･w

인도적으로 안락사 시킨 동물이나 사망 동물의 수에 따라, 표시 화살표를 따라 시험을 진행한다.

부록 2a. 시작용량 5 mg/kg·w

부록 2b. 시작용량 50 mg/kg·w

부록 2c. 시작용량 300 mg/kg·w

부록 2d. 시작용량 2,000 mg/kg·w

부록 3.

시험을 수행하지않고 LD50이 2,000 mg/kg을 초과할 것으로 예상되는 시험물질의 분류 기준

1. 위험 요소 카테고리 5의 기준은 급성 독성 위험이 상대적으로 낮지만 특정 상황에서는 취약 집단에 위험이 될 수 있는 시험물질의 파악을 위한 것이다. 이들 성분은 2,000-5,000 mg/kg 범위에서 경구 또는 피부 LD50를 가질 것으로 예상되며, 다른 경로에서는 이에 상응하는 값을 가질 것으로 예상된다. 시험물질은 다음의 경우에 2,000 mg/kg<LD50<5,000 mg/kg (카테고리 5, GHS)으로 정의되는 위험 요소 카테고리로 분류될 수 있다.

가) 사망률에 근거하여 부록 2a-2d의 시험 계획에 따라 이 카테고리로 정해지는 경우

나) LD50가 카테고리 5의 범위일 것이라는 믿을 수 있는 증거가 이미 있거나 다른 동물 시험이나 사람에서의 독성 영향에 따라 급성으로 사람 건강에 문제가 될 우려가 있는 경우

다) 데이터의 외삽, 추정, 측정을 통해 보다 위험한 카테고리로의 분류가 필요하지 않다고 판단되며

- 사람에서의 유의미한 독성 영향을 보여 주는 신뢰성 있는 정보가 있거나

- 경구 경로로 카테고리 4 값까지 시험했을 때 사망이 관찰되거나

- 설사, 입모(piloerection), 또는 털을 고르지 못하는 상태 (ungroomed appearance)을 제외하고, 최대 카테고리 4값까지 시험했을 때, 유의미한 임상적 독성증상이 있다고 전문가가 판단하거나

- 다른 동물 시험 결과를 통해 유의미한 급성 영향 가능성을 보여 주는 신뢰성 있는 정보를 전문가가 확인한 경우

2. 동물 복지 차원에서 카테고리 5 범위(5,000 mg/kg)에서의 동물 시험은 권장되지 않으며, 이 시험의 결과가 사람 또는 동물 건강 보호와 직접적인 연관성이 있을 가능성이 높은 경우에만 검토한다(9). 이 경우, 더 높은 용량에서는 추가 시험을 하지 않는다.

3. 5,000 mg/kg 용량에서의 시험이 필요한 경우, 한 단계만(즉, 3마리) 요구된다. 첫 투여 동물이 사망하면, 투여 용량을 부록 2의 흐름도에 따라 2,000 mg/kg에서 진행한다. 첫 동물이 생존하면, 추가로 2마리에 투여한다. 3마리 가운데 1마리만 사망하면, LD50은 5,000 mg/kg을 초과하는 것으로 예상된다. 2마리 모두 사망하면, 2,000 mg/kg에서 투여를 진행한다.

별첨 2. 원문(OECD TG 423)

“화장품 단회투여독성 동물대체시험법(독성등급법)

가이드라인(민원인 안내서)”

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